圖一：ATCC中Caco-2細胞形態(tài)
Caco-2 (人結直腸腺癌細胞)分離自一位72歲男性直腸原位癌。當細胞長滿時，表現(xiàn)出典型的腸細胞分化的特征。Caco-2細胞表達維生素A酸結合蛋白Ⅰ和視黃醇結合蛋白Ⅱ，角蛋白陽性。
本文為大家介紹Caco-2生長特性和常見問題解決策略。
生長特性
呈島狀生長，Caco-2細胞群的邊界光滑。
空泡多
Caco-2細胞群中常常含有巨大的空泡，這是細胞本身的特性，屬于正常現(xiàn)象。
難消化
Caco-2細胞與細胞間連接緊密，細胞難以消化解離。生長時間越長，細胞間連接越緊密，消化時間越長。消化時間為5-10分鐘，該細胞難以被吹散為單個細胞，當細胞能夠被吹散為小的細胞團塊，即可終止消化。
圖四：Caco-2 細胞難消化 200x
生長周期長
Caco-2傳代周期較長，倍增時間約為72h。Caco-2貼壁和生長都較為緩慢。按1:3傳代的情況下，約一周傳代一次。
Caco-2有少量發(fā)亮的細胞漂浮或黏附在細胞克隆上，是正常的，隨后會進入克隆并正常生長。所以避免頻繁觀察細胞，可以減少漂浮細胞產(chǎn)生。如果細胞隨著培養(yǎng)過程，漂浮得越來越嚴重，甚至大塊兒飄起，就要檢查培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)環(huán)境是否出現(xiàn)異常。細胞密度越高，消化時間越長。
血清質量差異可能引起細胞狀態(tài)變化，建議選用高質量的胎牛血清。
培養(yǎng)條件
培養(yǎng)體系：DMEM,HIGH GLUCOSE 10%胎牛血清（南美級別）。
傳代比例：不高于1:3傳代（培養(yǎng)面積比）。
傳代方式：消化5~10分鐘。
換液頻率：每周換液1-3次。
倍增時間： 3~4天（ATCC）；~80小時(DMSZ)；~32小時(PBCF)；~60-70小時(CLS)。
凍存液配方：DMEM,HIGH GLUCOSE+10%FBS+10%DMSO。
培養(yǎng)要點
該細胞貼壁較慢，在復蘇或傳代初期，若有許多細胞或細胞碎片漂浮為正?，F(xiàn)象，為避免在細胞附著初期干擾細胞，建議到第三天才換液。待細胞貼壁后，一周即可長滿（1:3傳代），若細胞生長過慢，可適當調(diào)整血清濃度到20%。
常見問題
Lisa
細胞不貼壁怎么辦？
賽庫生物
Lisa
漂浮細胞多怎么辦？
賽庫生物
注意事項
1、細胞貼壁慢特別是剛復蘇時，一般2-3天貼壁展開，會有空泡。
2、細胞在傳代細胞中，注意消化散，否則難以貼壁。
3、成團生長，細胞密度越大，表面空泡黑點越多。
4、一般細胞長至80%傳代，細胞成片，其實密度很大。
5、細胞生長太滿對細胞狀態(tài)影響嚴重，傳代后易碎，死亡。
6、細胞生長時間越長，消化時間越長。
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