商品詳情
【培養(yǎng)條件】
Alpha MEM(CellCook cat:CM2003,或同配方) 12.5%馬血清(CellCook cat:CM1001) 12.5%澳洲胎牛血清(CellCook cat:CM1003L) 添加劑:0.2mM肌醇,0.1mM巰基乙醇,0.02mM葉酸,100-200U/ml IL-2(Cellcook cat:CM1014)
【推薦培養(yǎng)試劑】
配套完全培養(yǎng)基(CellCook cat:(CellCook cat:CC1624GM))
【傳代比例】
1:3傳代(培養(yǎng)面積比)
【傳代方式】
離心收集(1000RPM,5分鐘)
【換液頻率】
2~3天換液1次
【凍存液配方】
50%完全培養(yǎng)基+40%胎牛血清+10%DMSO
【難度等級】
++++
【培養(yǎng)要點】
使用指定培養(yǎng)基配方,且對IL-2依賴,建議使用高質(zhì)量IL-2進行培養(yǎng),細胞對養(yǎng)分及氧氣敏感,需定期更換培養(yǎng)基及控制細胞密度,且細胞生長速度較NK92/MI緩慢。具體細節(jié)可登陸公司網(wǎng)站進行查看
【特征特性】
NK-92是從一位患有急進性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細胞衍生來的一株白細胞介素-2依賴型NK細胞株。這株細胞對很多惡性細胞有細胞毒性;鉻釋放試驗顯示它能殺死K562和DAUDI細胞。NK-92細胞(經(jīng)過照射以防止增殖)可以有效地用于血液中白血病的體外免疫清掃而不危及血細胞的功能。NK-92細胞有以下特征:CD2, CD7, CD11a, CD28, CD45,CD54表面標記陽性,CD56亮;CD1, CD3, CD4, CD5, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20,CD23, CD34和HLA-DR陰性。PCR檢測細胞存在EBV的DNA序列。
藥篩:通過慢病毒感染的方式將攜帶熒光的基因片段整合進細胞基因組,使細胞表達熒光蛋白,在熒光顯微鏡下可以進行觀察,標記后的細胞非常容易進行追蹤檢測。由于是用慢病毒轉(zhuǎn)染的方式,導致細胞熒光表達量的不確定性,為增強細胞熒光表達量可進行抗性篩選。正常培養(yǎng)過程中定期(一個月2-3次或頻率自定)用終濃度4ug/mL的嘌呤霉素追加篩選,凍存后復蘇也建議可以追加篩選一次,不需要培養(yǎng)過程中每天都加藥。