細胞培養(yǎng)過程中很容易稍有不慎細胞狀態(tài)就會變差，這些小細節(jié)究竟如何影響的細胞狀態(tài)？在培養(yǎng)時我們又該如何避免？今天給大家整理了細胞培養(yǎng)過程中最容易忽視的幾大致命細節(jié)，一起來學(xué)習(xí)吧！
市面上常見的有經(jīng)TC處理的細胞培養(yǎng)瓶/皿，可以輔助貼壁細胞貼壁；培養(yǎng)懸浮細胞時應(yīng)采用無TC處理的細胞培養(yǎng)瓶/皿。
貼壁細胞在正常情況下都會貼壁，但某些細胞本身特性貼壁性差，例如Beas-2B人正常支氣管上皮細胞和HCEC-B4G12人角膜內(nèi)皮細胞，在培養(yǎng)特殊細胞時，需要對培養(yǎng)瓶/皿進行包被，促進細胞黏附，才可以使用。常用的包被液有纖連蛋白、I型膠原等混合物，培養(yǎng)時可根據(jù)說明書使用。
?新手建議使用細胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)，方便操作。
無論什么細胞，匯合度80%~90%左右即需要傳代，不可長滿。正常細胞（二倍體）存在貼壁接觸抑制，長滿后細胞生長停止，而腫瘤細胞等非正常細胞，接觸抑制作用較弱，可生長至較高的細胞密度，但某些細胞一旦長過，其損傷難以逆轉(zhuǎn)，所以培養(yǎng)細胞時不建議細胞密度太高。
某些特殊的細胞匯合度達到100%會開始分化，例如C2C12小鼠成肌細胞，分化的細胞沒有增殖能力，影響后續(xù)實驗，耽誤實驗進展，需要嚴格控制細胞傳代密度。
對于一些聚團疊加生長的細胞，需根據(jù)實際細胞量判斷是否需要傳代，并不單純依據(jù)細胞鋪滿瓶底的匯合度，及時傳代，避開細胞損傷，且這類細胞的消化時間一般較久，需要根據(jù)具體的細胞量適當調(diào)整消化時間。例如HepG2人肝癌細胞、MCF7人乳腺腺癌細胞、Caco-2人結(jié)直腸腺癌細胞等。
胰蛋白酶通常使用0.25%，含EDTA，不含鈣鎂離子。鈣鎂離子會與EDTA螯合，影響消化效果。所以加胰酶消化前需要用不含鈣鎂離子的PBS緩沖液潤洗2~3次。
細胞消化時間可以參考說明書，但具體的消化時間需要結(jié)合細胞量、胰酶濃度等適當調(diào)整。調(diào)整。
大多數(shù)細胞的消化時間在2-3分鐘左右，部分貼壁性較差的細胞消化時間較短，部分貼壁牢固且聚團疊加生長的細胞消化時間較長，最長的有30分鐘，具體的細胞時間參考說明書，并結(jié)合實際細胞量調(diào)整。
消化程度判斷：顯微鏡下細胞皺縮變圓，分散成單細胞，傾斜培養(yǎng)瓶可呈流沙狀脫落即可終止消化。一些聚團疊加生長的細胞在消化過程中可能不會完全分散成單細胞，皺縮變圓，分解成小細胞團，輕輕吹散再消化1分鐘左右即可終止消化。
大部分培養(yǎng)基適合于95%空氣 5%CO2的培養(yǎng)箱。但L15培養(yǎng)基適合于100%空氣，無CO2的培養(yǎng)箱，L15培養(yǎng)基不需要CO2平衡PH，CO2會導(dǎo)致培養(yǎng)液PH降低（培養(yǎng)液變黃），嚴重影響細胞生長；所以使用L15培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞，但沒有100%空氣培養(yǎng)箱時，可以選擇密封的細胞培養(yǎng)瓶/皿培養(yǎng)。
對于大部分人源細胞和溫血動物細胞系來講，比較適宜的培養(yǎng)溫度是37℃。但有細胞比較特殊，需要用特定的溫度培養(yǎng)，比如hFOB1.19 SV40轉(zhuǎn)染人成骨細胞細胞的培養(yǎng)溫度為34℃，37℃培養(yǎng)會死亡。
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