5tgm1培養(yǎng)小tips
5tgm1小鼠骨髓瘤細(xì)胞作為一株不在ATCC庫(kù)且可查資源十分有限的細(xì)胞系是不是也讓各位胞友們?cè)谂囵B(yǎng)過(guò)程中感覺到有些棘手或者不那么有把握呢？那么作為我們賽庫(kù)細(xì)胞庫(kù)長(zhǎng)掛的一員，在這株細(xì)胞的培養(yǎng)方面我們也有些經(jīng)驗(yàn)想跟大家交流分享！
5tgm1，別名5T33細(xì)胞系，正常狀態(tài)下大體呈圓形，大小均一，通體透亮，是一株有聚團(tuán)生長(zhǎng)特性的懸浮細(xì)胞。雖然生長(zhǎng)特性與很多懸浮細(xì)胞有差別，但也大致適用于懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)方法，我們按以下培養(yǎng)條件培養(yǎng)細(xì)胞整體來(lái)說(shuō)還是很好養(yǎng)的！
培養(yǎng)條件
IMDM(Gibco cat:12440,或同配方) 10%胎牛血清
推薦培養(yǎng)試劑
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基礎(chǔ)培養(yǎng)基：IMDM(CellCook:CM2011或Gibco cat:C12440500BT,或同配方)
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血清：南美胎牛血清(CellCook cat:CM1002L)
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添加劑：\
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配套完全培養(yǎng)基(CellCook cat:CC9099M)
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傳代比例：維持細(xì)胞密度在1*10^5-2*10^6cells/ml
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傳代方式：1:3傳代，離心收集(1000rpm,5分鐘)
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換液頻率：2~3天換液1次
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凍存液配方：RPMI 1640+10%FBS+10%DMSO
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難度等級(jí)：+
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培養(yǎng)要點(diǎn)：嚴(yán)格控制細(xì)胞密度，密度較高時(shí)容易產(chǎn)生大量細(xì)胞碎片
細(xì)胞正常形態(tài)參考圖
如上圖所示，這株細(xì)胞大體圓滾透亮，但是放大圖片會(huì)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞邊緣線條不是很流暢，會(huì)有些毛糙不平滑，似有偽足，這個(gè)是細(xì)胞正常狀態(tài)，不用慌張，不要因此就認(rèn)為細(xì)胞狀態(tài)質(zhì)量差將其棄養(yǎng)，細(xì)胞狀態(tài)還得結(jié)合細(xì)胞活率和生長(zhǎng)速度等整體判斷。
培養(yǎng)中常見問(wèn)題及解答
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1、這株細(xì)胞好養(yǎng)嗎？長(zhǎng)得快嗎？
答：這株細(xì)胞培養(yǎng)難度系數(shù)不高，比較好養(yǎng)，狀態(tài)密度正常情況下長(zhǎng)得還是比較快的，狀態(tài)較好1-2天也能達(dá)到傳代密度。
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2、細(xì)胞狀態(tài)差是怎么樣的？怎樣算狀態(tài)差？
答：細(xì)胞變黑，折光度變差，有裂解傾向，死細(xì)胞變多，碎片雜質(zhì)變多，培養(yǎng)液變渾濁，細(xì)胞不聚團(tuán)。例如下圖細(xì)胞真菌污染后的狀態(tài)：
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3、細(xì)胞密度很低不聚團(tuán)、生長(zhǎng)慢怎么辦？
答:①豎瓶培養(yǎng)。豎瓶可以提高細(xì)胞密度促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)，將培養(yǎng)瓶豎置時(shí)需注意吹下培養(yǎng)瓶底部的細(xì)胞，避免細(xì)胞殘留，密度起來(lái)后恢復(fù)水平放置，以保持一定氣液比保證細(xì)胞呼吸，避免長(zhǎng)期豎瓶讓細(xì)胞出現(xiàn)傳質(zhì)問(wèn)題；
②提高血清濃度到15%調(diào)整細(xì)胞狀態(tài)；
③傳代密度不要太低，控制好傳代比例。
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4、這株細(xì)胞什么時(shí)候可以傳代呢？該怎么傳代呢？
答：懸浮細(xì)胞是否能傳代主要通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)看細(xì)胞密度來(lái)判斷。懸浮細(xì)胞常規(guī)推薦接種密度為3-5×105cell/mL，生長(zhǎng)到2×106cell/mL左右可繼續(xù)傳代。正常情況下可通過(guò)離心（800-1000rpm，5min）收集1:3傳代。（這株細(xì)胞需要注意控制細(xì)胞密度，有一定密度依賴，細(xì)胞狀態(tài)不好密度太低可能會(huì)不增殖，密度太高時(shí)容易產(chǎn)生大量碎片）.
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5、細(xì)胞剛復(fù)蘇狀態(tài)不好怎么辦？
答：復(fù)蘇第二天如果細(xì)胞狀態(tài)不行可以補(bǔ)加血清、因子調(diào)整，如果細(xì)胞狀態(tài)實(shí)在太差死細(xì)胞及細(xì)胞碎片比較多，細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境太差可以考慮先離心去除細(xì)胞碎片，換新鮮培養(yǎng)基及提高血清濃度培養(yǎng)觀察細(xì)胞狀態(tài)（看情況，懸浮細(xì)胞復(fù)蘇三天內(nèi)一般不建議離心換液）。
很多懸浮細(xì)胞剛復(fù)蘇時(shí)活力是相對(duì)較差的，此時(shí)我們需要給點(diǎn)耐心，等待細(xì)胞完成自我修復(fù)進(jìn)入對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期。比如THP-1復(fù)蘇后往往需要7-10天的恢復(fù)期，Jurkat，Clone E6-1復(fù)蘇后也需要5-7天才能恢復(fù)狀態(tài)。很多新手在此期間容易失去信心就直接放棄培養(yǎng)了，還是需要多一點(diǎn)耐心哦！
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