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Cell culture

不就是養(yǎng)細(xì)胞嘛，能有多難！信心來源于知識儲備，小編整理羅列了以下科普文章傳送門，哪里有疑問點(diǎn)哪里，給您支招和解惑，手把手帶您入門，新手胞友常備寶典的不二選擇，養(yǎng)細(xì)胞不再戰(zhàn)戰(zhàn)兢兢、小心翼翼！

01 細(xì)胞營養(yǎng)物及培養(yǎng)器皿選擇

? 細(xì)胞培養(yǎng)基最全介紹!

https://mp.weixin.qq.com/s/vLdw0jl71sVrFCenbAdF5w??（點(diǎn)擊）

? 賽庫即用型完全培養(yǎng)基

https://mp.weixin.qq.com/s/AH6pTQw9LHZ0GQjiYSlU6A??（點(diǎn)擊）

? 養(yǎng)細(xì)胞，胎牛血清至關(guān)重要!

https://mp.weixin.qq.com/s/MUPkXh3sDMf3__P28li3vw??（點(diǎn)擊）

? 好產(chǎn)品值得被推薦，我為胎牛血清代言!!

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? TC處理是什么

https://mp.weixin.qq.com/s/e-RIwYFLyJjylSMZ8ycqBw??（點(diǎn)擊）

02 細(xì)胞接收

? 細(xì)胞接收操作及常見問題

https://mp.weixin.qq.com/s/bJyHAYLJ7lUchaCkrEzeCQ??（點(diǎn)擊）

? 細(xì)胞接收說明

https://mp.weixin.qq.com/s/0gRmCiyW8JMUojESpcmRaA??（點(diǎn)擊）

03 細(xì)胞培養(yǎng)

? 細(xì)胞培養(yǎng)全指南（含污染分類及防治）

https://mp.weixin.qq.com/s/ut6cDmfsYH1xpSKq2kxzvg??（點(diǎn)擊）

? 細(xì)胞培養(yǎng)中容易忽視的幾個致命細(xì)節(jié)

https://mp.weixin.qq.com/s/9wlod6FeNYiCtl25VuIMjg??（點(diǎn)擊）

? 細(xì)胞培養(yǎng)的常見難題

https://mp.weixin.qq.com/s/QyCfTGBddC7Oa--y3ym4WQ??（點(diǎn)擊）

? 貼壁細(xì)胞如何傳代

https://mp.weixin.qq.com/s/3LjATnLkzmMEAh4TvN-4dw??（點(diǎn)擊）

? 懸浮細(xì)胞如何傳代

https://mp.weixin.qq.com/s/c765aP0Hy3rOdekY4wzK4A??（點(diǎn)擊）

? 貼壁懸浮混合型細(xì)胞--培養(yǎng)方法及注意事項(xiàng)

https://mp.weixin.qq.com/s/Dc7Pa_Xwc6rThCB-G6aLIA??（點(diǎn)擊）

? 細(xì)胞凍存和復(fù)蘇的那些事

https://mp.weixin.qq.com/s/6g1URnPKw_9PeatY4FwRjg??（點(diǎn)擊）

04 細(xì)胞常見異常情況原因分析及解決方法

? 為什么細(xì)胞出現(xiàn)空泡？

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? 貼壁細(xì)胞不貼壁？

①消化過度造成細(xì)胞損傷→縮短消化時間或降低胰酶濃度，適度消化

②支原體污染→定期抽樣檢測，發(fā)現(xiàn)污染建議丟棄

③培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）→用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2

④細(xì)胞老化失去貼附性或者復(fù)蘇細(xì)胞本身狀態(tài)不好已經(jīng)老化→啟用新的保種細(xì)胞

⑤接種細(xì)胞起始濃度太低或太高、接種細(xì)胞數(shù)目太少→調(diào)整合適的接種濃度，接種數(shù)目不要太少，否則無法分泌足夠的細(xì)胞外基質(zhì)

? 細(xì)胞生長慢？

①更換培養(yǎng)液或血清→換培養(yǎng)條件前先取部分培養(yǎng)物做測試，測試后再確定是否更換

②培養(yǎng)液中細(xì)胞必需生長因子耗盡或成分破壞→補(bǔ)充生長因子或換新配置培養(yǎng)液

③培養(yǎng)物中出現(xiàn)少量污染→用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)污染建議丟棄

④試劑保存不當(dāng)，成分破壞→血清于-10～-20℃保存，培養(yǎng)液于2～8℃避光保存，含血清完全培養(yǎng)液于2-8℃保存且在1周內(nèi)用完

⑤細(xì)胞接種濃度太低→增加起始接種濃度

⑥細(xì)胞老化→啟用保種細(xì)胞

⑦支原體污染→定期檢測，發(fā)現(xiàn)污染建議丟棄

? 貼壁細(xì)胞生長周期變慢，邊養(yǎng)邊飄？

①傳代時密度太高或太低→建議貼壁細(xì)胞匯合度達(dá)80%傳代，傳代密度適中，傳代密度過低會延長生長周期

②傳代操作不當(dāng)→根據(jù)細(xì)胞特性決定細(xì)胞消化時間，一般在顯微鏡下觀察細(xì)胞回縮變圓并有少量細(xì)胞脫落即可終止消化，難消化的細(xì)胞可分次消化

③頻繁換液或者清洗細(xì)胞也會導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)變差→常規(guī)換液時間間隔為2～3天

? 貼壁細(xì)胞傳代后部分漂??？

①傳代前細(xì)胞密度太大→一般細(xì)胞匯合度達(dá)到80%時可進(jìn)行傳代操作，傳代密度需適中，傳代密度過高也會導(dǎo)致傳代后漂浮

②細(xì)胞狀態(tài)不好→可通過提高血清比例、穩(wěn)定培養(yǎng)環(huán)境等方法進(jìn)行改善

③吹打次數(shù)過多造成機(jī)械損傷→輕柔吹打，細(xì)胞呈單顆粒時可停止吹打，吹打過程避免氣泡產(chǎn)生

④培養(yǎng)基更換后不適應(yīng)→更換回原來的培養(yǎng)基或與原培養(yǎng)基比例混合后使用使細(xì)胞有個適應(yīng)期

? 貼壁細(xì)胞傳代后全部飄起？

檢查所使用的培養(yǎng)基的顏色是否偏紫色、瓶蓋是否透氣、不透氣瓶蓋是否被擰松、培養(yǎng)基量是否太少或培養(yǎng)基存放時間太長致培養(yǎng)基變堿→建議配好完全培養(yǎng)基后分裝到50mL離心管并于一周內(nèi)用完，量少時放到15mL離心管里保存。（如果培養(yǎng)箱二氧化碳濃度升高，培養(yǎng)基顏色偏紫，PH升高，培養(yǎng)基會變堿）

? 貼壁細(xì)胞傳代后細(xì)胞成團(tuán)？

①細(xì)胞本身特性→聚團(tuán)生長屬于正常情況，除非實(shí)驗(yàn)需要，否則沒必要強(qiáng)行分開

②傳代消化時消化時間不夠或沒吹散→下次傳代消化開即可

③血清品質(zhì)差→盡量使用品質(zhì)好一點(diǎn)的血清，細(xì)胞狀態(tài)馬上就會不一樣了，現(xiàn)在血清市場魚龍混雜，買的時候擦亮眼睛

④細(xì)胞狀態(tài)差→提高血清濃度

? 傳代后細(xì)胞變形？

①連續(xù)培養(yǎng)的細(xì)胞系不同實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的形態(tài)會有不一樣，就像hela細(xì)胞不同實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的形態(tài)都不一樣，個人操作和血清批次等都會影響細(xì)胞形態(tài)

②變形，細(xì)胞還在生長→可能是血清批次不一樣導(dǎo)致，建議使用同一批次血清，更換血清時需與原血清比例混合后使用，使細(xì)胞有過渡期

③變形，細(xì)胞不長且碎片增多→可能是傳代操作過程中損傷，常見于消化不當(dāng)或支原體等污染致細(xì)胞病態(tài)，消化時間根據(jù)每個細(xì)胞的狀態(tài)來調(diào)整，不要消化過度或者消化不充分，培養(yǎng)過程嚴(yán)格無菌操作，確保細(xì)胞無外源污染

? 懸浮細(xì)胞貼壁？

①細(xì)胞本身特性→正?，F(xiàn)象

②靜置時間長沉底貼壁→晃一下或者拍一下能起來，貼壁松散的不用做特殊處理

③受刺激致貼壁→用無TC處理培養(yǎng)器皿，避免染菌，用優(yōu)質(zhì)血清

? 懸浮細(xì)胞生長慢或不生長？

①接種密度太低→控制接種傳代密度

②細(xì)胞狀態(tài)差→豎瓶培養(yǎng)，提高血清濃度，傳代可以看情況選擇補(bǔ)液或者半換液方式

? 懸浮細(xì)胞聚團(tuán)成簇？

①本身特性→正?，F(xiàn)象

②少量聚團(tuán)，葡萄串狀→正?，F(xiàn)象，密度較低時易出現(xiàn)，可通過靜養(yǎng)（少操作，少觀察）、補(bǔ)加血清（5%）等方式調(diào)整

③培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子→用無鈣鎂離子PBS洗滌細(xì)胞，輕輕吹散

④血清品質(zhì)→使用優(yōu)質(zhì)血清